Les champignons peuvent être clonés en prélevant une culture de tissus et en la cultivant dans un milieu stérile composé de gélose glucosée de pomme de terre, qui fournit les nutriments nécessaires à sa croissance. Cette technique consiste à prélever un fragment stérile de l'intérieur d'un champignon hôte. Le procédé est comparable au prélèvement d'une bouture sur un arbuste pour ensuite l'enraciner. La culture obtenue produira des champignons génétiquement identiques au champignon parent.
Matériel nécessaire
- 450 g (1 lb) de pommes de terre
- 30 g (1 oz) d'agar
- 2 cuillères à soupe de sucre
- Une casserole
- Un brûleur de cuisinière
- Un minuteur
- De l'eau pour couvrir les pommes de terre
- 1 litre (1 qt) d'eau du robinet
- Un verre mesureur
- Des cuillères doseuses
- Un couteau
- Une fourchette
- Une passoire
- Du papier d'aluminium
- Un bol en verre type Pyrex
- 9 tubes à essai avec bouchons
- Un scalpel ou couteau de précision type X-Acto
- Un briquet
- Une lampe à alcool
- 3 boîtes de conserve vides (soupe)
- 3 boîtes de thon vides
- Un gant de four
- Du ruban adhésif de masquage
- Un marqueur permanent
- De l'eau de Javel
- Un vaporisateur
- Du papier absorbant
- 1 champignon frais
Instructions
Préparer le gel d'agar
- Coupez les pommes de terre non épluchées en tranches, placez-les dans la casserole, recouvrez d'eau et faites cuire à feu moyen-vif jusqu'à ce qu'elles soient tendres.
- Filtrez le mélange et versez le liquide obtenu dans le bol en verre. À l'aide de la fourchette, incorporez 30 g d'agar et 2 cuillères à soupe de sucre. Ajoutez ensuite 1 litre d'eau au mélange.
- Recouvrez le bol d'une feuille de papier d'aluminium bien ajustée pour protéger son contenu. Versez 25 cl d'eau dans l'autocuiseur, placez-y le bol de mélange d'agar et fermez le couvercle. Faites chauffer à feu moyen pendant 20 minutes à environ 1 bar de pression (15 psi). Démarrez le minuteur dès que la pression est atteinte. Laissez ensuite refroidir l'autocuiseur pendant une heure avant de l'ouvrir.
Remplir les tubes à essai
- Disposez les boîtes de conserve et les boîtes de thon propres en rangée : elles serviront à maintenir les tubes à essai inclinés. Versez le mélange d'agar dans le verre mesureur, puis remplissez chaque tube au tiers. Vissez légèrement les bouchons ou recouvrez les extrémités avec du papier d'aluminium. Placez trois tubes remplis dans chaque boîte de conserve. Ajoutez 25 cl d'eau dans l'autocuiseur, placez-y les boîtes contenant les tubes, puis fermez le couvercle.
- Sterilisez les tubes à essai dans l'autocuiseur à 15 psi pendant 25 minutes. Démarrez le minuteur dès que la pression est atteinte, puis laissez refroidir l'autocuiseur sur la cuisinière pendant une heure.
- Ouvrez l'autocuiseur et retirez prudemment les tubes encore chauds à l'aide d'un gant de four. Placez trois tubes dans chaque boîte de thon afin de les maintenir inclinés pendant le refroidissement. Serrez les bouchons une fois que l'agar a refroidi et pris en gel. Recouvrez chaque boîte de tubes avec du papier d'aluminium pour les protéger de la poussière.
Prélever l'échantillon de champignon
- Vaporisez le plan de travail de la cuisine avec de l'eau de Javel diluée dans l'eau, puis essuyez-le avec du papier absorbant. Travaillez de préférence le matin pour éviter les courants d'air et la poussière en suspension. Pour les étapes suivantes, agissez rapidement.
- Installez les tubes à essai sur la table désinfectée, ainsi que le scalpel, le champignon frais, la lampe à alcool allumée et une quatrième boîte vide, qui servira à déposer la lame stérilisée à proximité de la flamme lorsqu'elle n'est pas utilisée.
- Ouvrez délicatement un tube à essai et tenez-le entre le majeur et l'annulaire de votre main gauche si vous êtes droitier. Maintenez le bouchon entre votre annulaire et votre auriculaire.
- Cassez le champignon en deux en veillant à ne pas laisser la partie intérieure toucher la table. Passez la lame du scalpel dans la flamme de la lampe à alcool, puis découpez un petit fragment de chair provenant de l'intérieur du champignon et déposez-le dans le tube. Refermez immédiatement le bouchon et replacez le tube contenant la nouvelle culture de tissus avec les autres. Entre chaque prélèvement, reposez la lame près de la flamme pour la maintenir stérile. Répétez l'opération pour les huit tubes restants.
- Enroulez du ruban adhésif de masquage autour de la base de chaque bouchon et inscrivez-y la date ainsi que la variété du champignon à l'aide du marqueur permanent. Conservez les tubes préparés dans une pièce sombre, à une température comprise entre 13 et 21 °C (55 et 70 °F), afin de favoriser le développement du mycélium.
Source : https://jardin.98905.com/plants-flowers-herbs/growing-mushrooms/1007024015.html