bouillon de soja Trypticase
5 ml tubes à essai , Photos, stériles bâtonnets en bois stérilisés et plafonnés
marquage cire crayon crémaillère Photos de tube à essai
des serviettes en papier Photos de Bleach ( 10 pour cent solution )
bec Bunsen Photos Matches
boucle d'inoculation
gélose de soja Trypticase
le réfrigérateur de l'incubateur de Petri plaques
Voir Instructions
tubes échantillon de sol
1 d'essai sont utilisés pour diluer les échantillons de sol .
Mettez de côté un tube à essai stérile bouché containg 5 ml de bouillon trypticase de soja nutriments . Choisissez un bâton de Popsicle stérile .
2 Utilisez un bâton de Popsicle stérile pour recueillir sol .
Allez dehors et prélever un petit échantillon de sol avec la pointe du bâton de Popsicle , utilisant une technique stérile , une méthode pour s'assurer que l'échantillon n'est pas contaminé , et l'utilisateur n'est pas infecté .
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Déboucher le tube à essai et le sol pour le bouillon de culture dans le tube à essai. Mélangez la terre dans le bouillon avec le bâton de Popsicle . Couvrir le tube à essai avec le bouchon . Inscrivez la date de collecte et de collecte emplacement sur le côté du tube de test en utilisant la cire crayon marqueur .
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Mettez le tube à essai dans un rack de tubes à essai pendant environ 30 minutes pour permettre au sol de s'installer à le fond .
Inoculate boîte de Pétri
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Désinfecter la surface de travail en le nettoyant avec 10 pour cent de l'eau de Javel et des serviettes en papier .
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Tourner la boîte de Pétri de sorte que le couvercle inférieur contenant l'agar-agar est en place . Dessinez un T sur la paupière inférieure , avec la barre transversale du T sépare le tiers supérieur du couvercle et la tige du T divisant les deux tiers inférieurs de moitié.
7 Utilisez un bec Bunsen à flamber inoculer boucles.
Allumez et allumer le brûleur Bunsen . Flamme de la boucle d'inoculation sur la flamme du bec Bunsen .
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Déboucher le tube à essai et toucher la boucle de la couche supérieure de liquide clair. Retirer la boucle et re- couvrir le tube à essai .
La méthode T- série
9 Faire une série de zigzag plus d'un tiers de l'assiette.
Utilisez la barre transversale du T que vous avez dessiné sur le dos du couvercle inférieur comme point de référence . Touchez l' anse d'un côté de l' espace au-dessus de la barre transversale T et tirer la pointe sur la surface de l' agar-agar dans une ligne en zigzag , se terminant la ligne de l'autre côté de l'espace .
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Retirez la anse et fermer la boîte de Pétri . Flamber l'anse dans le brûleur Bunsen , et laissez-le refroidir rapidement. Ouvrez la boîte de Pétri et toucher la boucle à un endroit près de la fin de la ligne déjà attiré par la boucle . Faire une autre ligne en zigzag perpendiculaire à la première ligne , couvrant le premier espace sous la barre transversale T et d'un côté de la tige .
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Retirer la boucle et fermer la boîte de Pétri . Flamber l'anse de nouveau , ouvrir la boîte de Pétri , et toucher la boucle légèrement refroidi à la deuxième ligne près de son extrémité . Tracez une autre ligne en zigzag à angle droit à la deuxième ligne dans l'espace ouvert restant sur la boîte de Pétri .
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Fermez la boîte de Pétri après le retrait de la boucle . Flamber l'anse et le mettre de côté . Éteindre le brûleur Bunsen .
Culture secondaire
13 Sélectionnez une seule colonie à isoler davantage les bactéries .
Mettez la boîte de Pétri dans un incubateur à 30 ° C pendant 48 heures. Prenez -le et examiner l'agar-agar pour la croissance de colonies bactériennes . Choisir une colonie qui ressemble uniforme et discrète dans l'apparence générale , une indication que la colonie est née de seulement une seule bactérie . Cercle de l'emplacement de la colonie sur le dos du couvercle inférieur avec le crayon marqueur .
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flamme la anse . Ouvrez la boîte de Pétri et toucher le peu refroidi boucle au centre de la colonie .
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Répétez les étapes de fabrication d'un T- série sur une nouvelle boîte de Pétri avec de l'agar dans le couvercle inférieur . Quand la série est faite et la boîte de Pétri est fermé , écrire la date et l' échantillon du sol de l'inoculum a été prise à partir du côté bas de la paupière inférieure . Éteindre le brûleur Bunsen .
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Incuber la plaque de Pétri à 30 degrés Celsius pendant 48 heures . Examiner les colonies qui se sont développées sur la gélose , à la recherche de l'uniformité de la couleur, la forme et la texture . Répétez la procédure de culture secondaire s'il ya des colonies qui s'écartent nettement en apparence des autres , ce qui indique que d'une seule bactérie n'a pas été isolé .
17 colonies d'aspect identique indiquent isolement bactérien .
Réfrigérer la plaque de gélose qui contient colonies identiques figurant sur - il , avec l'uniformité étant une bonne indication qu'une seule bactérie a été isolée à partir de l'échantillon de sol .
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effectuer d'autres tests pour l'identification de la bactérie isolée si vous le souhaitez , comme les taches de gram , l'examen microscopique et la culture sur différents types de gélose .
De:https://jardin.98905.com/garden-lawn/soil/1007006478.html